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保存温度
-20℃避光
注意事项
1.开盖后组份按要求条件保存。
2.拆封后请尽快使用完！
2.拆封后请尽快使用完！
有效期
6个月
检测方法
荧光显微镜/激光共聚焦
适用样本
植物切片/贴壁细胞
仪器准备
1.荧光显微镜/激光共聚焦
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
PBS缓冲液
耗材准备
1.玻片
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
2.细胞处理需要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。
3.标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根
据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。
4.染色后立即进行分析。
5.本染色液可用于细胞涂片、细胞的检测。
2.细胞处理需要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。
3.标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根
据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。
4.染色后立即进行分析。
5.本染色液可用于细胞涂片、细胞的检测。
使用方法
染色工作液的配制：
根据样本数量，用37°C培养箱预热的试剂B将BBcellProbeFLUO-3AM荧光染料200倍稀释，配制成染色工作液。
样本染色
冰冻切片
1.植物组织（叶片、根、茎等）快速冷冻（OCT包埋，-80℃冷冻1h)，切片厚度8-10μm。
2.室温复温5min，用PBS缓冲液洗涤3次，每次5min。
3.细胞壁通透处理：滴加试剂C室温孵育5min，PBS缓冲液洗涤3次（每次5min）
4.吸干切片表面缓冲液，滴加Fluo-3AM染色工作液。
5.放入湿盒，2-8℃C避光孵育60-90min。
6.转移至25-30℃避光孵育60-90min。
7.用PBS缓冲液洗涤4次，每次8min。
8.荧光显微镜观察：激发波长488nm，发射波长525nm（绿色荧光，胞质内信号为目标)。
培养细胞染色
1. 用PBS洗涤细胞2次。
2.细胞培养板中或细胞爬片上加入适量体积的染色工作液。
3.37°C孵育细胞20-60分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
4.吸干染色工作液，用HBSS洗培养板或盖玻片2~3次，每次用预热的PBS覆盖所有细胞，然后吸干培养基。
5.加入PBS，在37°C下再继续孵育20分钟。
6.然后用该细胞进行荧光钙离子检测。
7.用荧光显微镜或流式细胞仪检测激发波长为488nm，最大发射波长为525nm。
根据样本数量，用37°C培养箱预热的试剂B将BBcellProbeFLUO-3AM荧光染料200倍稀释，配制成染色工作液。
样本染色
冰冻切片
1.植物组织（叶片、根、茎等）快速冷冻（OCT包埋，-80℃冷冻1h)，切片厚度8-10μm。
2.室温复温5min，用PBS缓冲液洗涤3次，每次5min。
3.细胞壁通透处理：滴加试剂C室温孵育5min，PBS缓冲液洗涤3次（每次5min）
4.吸干切片表面缓冲液，滴加Fluo-3AM染色工作液。
5.放入湿盒，2-8℃C避光孵育60-90min。
6.转移至25-30℃避光孵育60-90min。
7.用PBS缓冲液洗涤4次，每次8min。
8.荧光显微镜观察：激发波长488nm，发射波长525nm（绿色荧光，胞质内信号为目标)。
培养细胞染色
1. 用PBS洗涤细胞2次。
2.细胞培养板中或细胞爬片上加入适量体积的染色工作液。
3.37°C孵育细胞20-60分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
4.吸干染色工作液，用HBSS洗培养板或盖玻片2~3次，每次用预热的PBS覆盖所有细胞，然后吸干培养基。
5.加入PBS，在37°C下再继续孵育20分钟。
6.然后用该细胞进行荧光钙离子检测。
7.用荧光显微镜或流式细胞仪检测激发波长为488nm，最大发射波长为525nm。
参考文献
1.Qin Xie et al.
Glial-derivedneurotrophicfactorregulatesenteric mastcellsand ameliorates dextransulfate
sodium-induced experimental colitis
Intermational Immunopharmacology 2020
2.Shuai Liu et al.
Gprotein-coupledestrogenreceptorlmediatesestrogeneffect inredcommoncarp(Cyprinuscarpio)
Comparative Biochemistry and Physiology Part C: Toxicology & Pharmacology 2020
3.QiuNan Chen et al.
Effectof sarcolipin-mediatedcelltransdifferentiationinsarcopenia-associatedskeletalmusclefibrosis
Experimental Cell Research 2020
Glial-derivedneurotrophicfactorregulatesenteric mastcellsand ameliorates dextransulfate
sodium-induced experimental colitis
Intermational Immunopharmacology 2020
2.Shuai Liu et al.
Gprotein-coupledestrogenreceptorlmediatesestrogeneffect inredcommoncarp(Cyprinuscarpio)
Comparative Biochemistry and Physiology Part C: Toxicology & Pharmacology 2020
3.QiuNan Chen et al.
Effectof sarcolipin-mediatedcelltransdifferentiationinsarcopenia-associatedskeletalmusclefibrosis
Experimental Cell Research 2020
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